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    學術交流

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    D-二聚體檢測在臨床應用中常見問題的探討

    時間: 2020-05-06

    近年來,D-二聚體作為體內交聯纖維蛋白水解的標志性產物,其臨床診斷價值已得到普遍認同。它以其高度的敏感性和陰性預示能力,在深靜脈血栓(DVT)和肺栓塞(PE)的排除、彌散性血管內凝血(DIC)的診斷及溶栓治療監測等方面具有良好的臨床應用價值。雖然D-二聚體檢測已得到推廣普及,但在D-二聚體實際應用中,仍存在一些對檢測參數的認識誤區,致使實驗室對一些檢測結果難以為臨床提供合理解釋,對由于方法學不同造成的檢測結果差異缺乏足夠的理解,給科室質量管理帶來困惑。


    一、不同試劑檢測結果不可比性

    D-二聚體檢測的基本原理均是基于抗原抗體反應。自1983年Rylatt等最先報道了D-二聚體的單克隆抗體后,有20多種D-二聚體單抗研發問世,目前有超過30種檢測方法和20多種單抗被使用。由于方法學上的原因,不同試劑測定同一份標本中的D-二聚體濃度往往不具有可比性。其原因主要有:

    1.單克隆抗體不同

    這里需要說明的是,我們通常所說的“D-二聚體”,在循環體內并不是一個結構簡單均一的物質,而是含有D-二聚體結構的大小不同片段的混合物(如DD、DY、XD、XY、DXD、YXD、DXXD等,分子量為190KDa—720KDa)。針對不同片段制備的單克隆抗體對同一份血漿中不同片段的結合能力也不同。目前尚無國際統一標準的單抗,也無統一的參考方法。另外,在自動化凝血儀上采用的免疫比濁法測定還受到乳膠顆粒特征的影響,各試劑制造商選擇乳膠顆粒大小不等,結合單抗能力也有差異,反應后吸光特性也不一樣。單克隆抗體特異性差異和試劑生產工藝的不同,致使各試劑間檢測D-二聚體的結果缺乏可比性。

    2.報告結果缺乏統一的標準單位

    D-二聚體檢測的報告單位通常包括纖維蛋白原等量單位(FEU)和D-二聚體單位(DDU)兩種形式。FEU是將D-二聚體的量用降解前纖維蛋白原分子的量來表達,因此,用FEU表達的D-二聚體的量相當于用DDU表達的約1.7-2.0倍。在D-二聚體報告方式中還包括Ng/ML、Ug/ML和Mg/L等形式。通常應該直接采用制造商提供的單位,不建議進行形式和量綱的轉換。

    3.參考區間不同

    各試劑制造商在試劑使用說明書中提供的參考區間,除因方法學和單抗因素之外,通常所選的受試人群也是不同的,特別是進口試劑,種族、性別、年齡和生理等方面的差異都會造成統計結果的不同,直接應用試劑說明書中的參考區間,往往會出現一些難以解釋的現象,甚至誤導臨床應用。

    4.校準品不同

    由于每種試劑所使用的抗體不同,因此相應的校準品不同,目前校準物包括交聯纖維蛋白凝塊被消化處理后的血漿,部分純化的D-二聚體制品及高分子量纖維蛋白寡聚體制品等。生產制造商選擇適合其產品的校準品,但是一種定值校準品并不適用于另一品牌的試劑,因此,D-二聚體測定沒有參考標準,方法之間校準的可能性也很低。


    目前,國內醫學實驗室所采用的D-二聚體分析系統主要包括西門子、貝克曼-庫爾特、思達高、羅氏、日本積水等,還有一些國產試劑,這些體系檢測結果之間的可比性較低,且參考值和采用的報告單位均不同,國內雖有一些不同系統比對的文獻報道,但結果不一,缺乏普遍的指導意義。有的實驗室同時采用2種D-二聚體檢測系統進行標本測定,由此產生的結果差異不僅會給臨床診斷造成混亂,同時也給實驗室質量管理帶來困惑。解決的辦法是一個實驗室只選用一種D-二聚體檢測系統,如已有2種檢測系統,應分別制定不同系統的參考區間和所提供服務群體的Cutoff值,并向臨床說明。


    二、參考區間與Cutoff值

    如前所述,由于D-二聚體檢測的方法學及所用抗體的差異,要求實驗室建立自己的參考區間和用于排除深靜脈血栓和肺栓塞的Cutoff值。參考區間的建立相對較易,它所反映的是當地健康人群D-二聚體的水平。而Cutoff值的建立則較為復雜,它所反映的是懷疑有DVT和PE的病人是否真有DVT和PE可能的臨界值。國外通常采用以下步驟建立:1.在不同地區建立樣本采集點;2.收集門診懷疑有DVT和PE的病人樣本,樣本量至少在300人以上,其中包括25%的患者確診為PVT或PE;3.病人選擇,采用Wells 的驗前概率(Pretest Probability PTP)評估規則和影像學檢查,并對陰性病人進行為期三個月的隨訪,以最終確診是否患有DVT或PE;4.剔除預防或抗凝治療的病人和孕婦;5.對所有選中的疑似患者同時進行D-二聚體檢測和影像學檢查;6.對D-二聚體檢測結果作受試者工作特征(ROC)曲線并確定Cutoff值。目前尚未見國內有關D-二聚體檢測Cutoff值建立的正式報道。鑒于樣本采集較為困難,CLSI(美國臨床實驗室標準化協會)建議可以采用試劑制造商提供由權威機構(如FDA)驗證的Cutoff值(CLSI H59-P)。

    值得注意的是,D-二聚體檢測的Cutoff值只是用來排除DVT和P


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